Développement d'un vaccin influenza à base de pseudo-particules virales produites ex vivo ou in vivo après vaccination ADN. – PseudoFlu

RESUME PROJET – Contexte scientifique et objectifs
Nous avons développé un concept de vaccination fondé sur la génération de pseudo particules virales (PPV) exprimant une enveloppe virale hétérologue, notamment l'hémagglutinine (HA). Les PPV sont produites par les protéines gag de rétrovirus de la protéine HA du virus influenza. La simple co-expression de gag et HA permet la formation de PPV ne contenant aucun génome et exprimant HA dans sa conformation native, particulièrement efficace pour induire des réponses neutralisantes.
La production des PPV est réalisée ex vivo ou in vivo par l'administration de plasmides codant pour gag et HA. Ces «plasmo-PPV » peuvent induire des réponses neutralisantes extrêmement efficaces avec des quantités d'ADN de l'ordre du microgramme.
Ce projet est porté par deux équipes ayant une longue expérience de collaboration et apportant des compétences complémentaire en virologie et immunologie. Il devrait permettre de valider le concept des plasmo-PPV pour la vaccination contre les virus influenza.
RESUME PROJET – Description
La première partie du projet consistera à optimiser les constructions génétiques permettant la réalisation des HA-PPV. Les différents paramètres, comme notamment les constructions optimales permettant d'exprimer à la fois HA, NA et éventuellement M2 de flu, seront définis pour la production optimale des HA-PPV in vitro ou in vivo par plasmo-PPV. Dans ce dernier cas, nous comparerons des stratégies basées sur la co-administration de plasmides indépendants codant pour ces différentes protéines ou plasmides uniques portant différentes cassettes d'expression. L'évaluation des différentes constructions sera réalisée par la quantification des PPV dans le milieu extracellulaire des cellules productrices.

La seconde partie du projet consistera en l'évaluation de l'efficacité vaccinale des PPV. Les différentes constructions seront administrées à la souris sous forme de PPV ou de plasmo-PPV, et les réponses immunitaires cellulaires et neutralisantes seront monitorées. Pour la neutralisation, nous avons mis au point un test utilisant des particules rétrovirales défectives pseudotypées par HA capable d'exprimer un génome GFP encapsidable après infection. Les réponses cellulaires et neutralisantes seront évaluées de façon quantitative grâce à la standardisation des procédures de mesure.

La troisième partie du projet consistera en l'évaluation des meilleurs schémas de vaccination, que ce soit en termes de nombre d'administrations, de doses et de calendrier. L'administration sous forme de plasmo-PPV sera privilégiée, mais nous évaluerons également des stratégies prime-boost avec plasmo-PPV et PPV.

RESUME PROJET – Resultats attendus
Pour être utile, une vaccination contre un variant de la grippe aviaire adapté à l'homme devra pouvoir être mise en oeuvre très rapidement et induire des réponses immunitaires efficaces le plus vite possible.
À l'issue de ce travail nous aurons optimisé des cassettes d'expression nécessaires à la formation de PPV pseudotypées avec une HA d'influenza et optimisé les stratégies d'immunisation à l'aide de ces PPV pour obtenir les réponses neutralisantes les plus rapides et efficaces possibles. Ces résultats auront validé notre concept et devraient permettre d'envisager une utilisation de cette stratégie dans le cas de nécessité. En effet, cette stratégie permet d'envisager la mise en production d'un vaccin plasmo-PPV quinze jours après l'identification d'une souche pathogène d'influenza. Ce type de vaccin, s'il induisait des réponses neutralisantes efficaces, aurait donc un potentiel important en cas d'émergence de tel pathogène.