Maladie de Whipple et trafic intracellulaire – Whipple's disease

La maladie de Whipple est une infection chronique due à une bactérie intracellulaire, Tropheryma whipplei (Tw). Cette maladie rare est mal comprise. Les signes cliniques sont non spécifiques. La diarrhée est le symptôme le plus classique mais tous les organes peuvent être atteints. Le diagnostic reste difficile basé sur des biopsies digestives, d'où les retards diagnostiques en l’absence de diarrhée. Sans traitement adapté, l'évolution spontanée est le décès. Malgré ce traitement, le taux de rechute est estimé à 20%. L'Unité des Rickettsies a joué un rôle déterminant dans la connaissance de la maladie grâce à l'isolement de la première souche de Tw. Depuis, la mise au point de nouveaux outils diagnostiques, le séquençage du génome complet et l'évaluation de la sensibilité aux antibiotiques de la bactérie ont été effectuées dans cette unité qui est centre de référence cette maladie dans le cadre des maladies orphelines. Cette unité est aussi spécialisée dans l’étude des macrophages humains et du trafic intracellulaire d’une autre bactérie intracellulaire, Coxiella burnetii. Les moyens utilisés par une bactérie pour envahir et se multiplier dans une cellule hôte restent mal compris. Tw a apparemment restreint son adaptation à des cellules dotées d'un puissant équipement bactéricide, les macrophages. La réussite de sa stratégie est illustrée par les difficultés thérapeutiques qu’engendre sa localisation intracellulaire. Notre désir est de mieux comprendre l’interaction Tw-macrophages en nous assignant trois objectifs. Le premier sera d'étudier le trafic intracellulaire de Tw dans les macrophages humains. Une approche morphologique en microscopie confocale permettra l'analyse de ces interactions grâce à des anticorps spécifiques des divers compartiments intracellulaires susceptibles d’être impliqués dans le trafic intramacrophagique. La composition moléculaire des phagosomes contenant Tw sera étudiée par électrophorèse 2D et immunoempreinte grâce à une stratégie d’isolement des phagosomes en cytométrie en flux. La carte protéique de ces phagosomes sera comparée à celles de phagosomes contenant d’autres mircroorganismes. Nous appliquerons cette démarche aux macrophages de patients atteints de maladie de Whipple. Notre deuxième objectif sera d’évaluer le rôle du pH intravacuolaire dans l’expression de la virulence de Tw dans les macrophages humains. Des travaux ont montré que le pH intravacuolaire jouait un rôle dans la survie des pathogènes intramacrophagiques. Notre troisième objectif sera de caractériser le rôle de l'activation des macrophages dans la maladie. La survie intracellulaire de Tw semble être favorisée par des cytokines comme l'IL-16. L'IFNg, pourrait lui induire la mort de Tw. Le rôle de l'activation macrophagique sur les étapes du trafic intracellulaire de Tw sera étudié comme suit. Les macrophages humains seront traités par de l'IFNg recombinant ou des agents qui bloquent son action, et le compartiment intracellulaire dans lequel se s