– VARHISTONES

En plus des histones conventionnelles qui forment le c?ur du nucléosome, les cellules expriment des isoformes en faible quantités que l'on appelle les variants d'histones. Des études récentes sur les variants des histones H2A et H3 indiquent que l'incorporation de variant d'histone dans la chromatine joue un rôle essentiel pour réguler l'expression du génome et des phénomènes épigénétiques. Dans ce projet, nous proposons une étude systématique pour découvrir différents aspects des fonctions des histones variants. En particulier, nous étudierons les relations structure-fonction des variants mH2A, H2ABbd, H2AZ, H3.3 et CENPA grâce a une combinaison de techniques en biologie moléculaire et cellulaire, de biochimie, biophysique et physique. L'organisation, la stabilité, la dynamique et la compétence transcriptionnelle de nucléosomes reconstitués avec des variants d'histones seront étudiées. Les mécanismes de déposition de histones variants et l'identification des facteurs impliqués dans l'assemblage de la chromatine variante seront analysés en identifiants les protéines qui interagissent avec les histones variants avant leur déposition au sein de la chromatine. Nous étudierons la distribution des histones variants au sein du génome par des techniques d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) combiné a des expériences d'hybridation sur des puces contenant des séquence représentant le génome (ChIP on ChIP). Nous étudierons aussi la localisation des protéines endogènes et des protéines comportant une étiquette exprimées dans des cellules afin d'étudier la déposition des histones variants couplée ou non à la réplication. Nous utiliserons des puces à ADN permettant d'analyser la distribution des variants d'histones au sein de région chromosomique défini dans le cadre du projet ENCODE et l'identification des gènes dont l'expression est affectée par l'élimination d'un variant d'histone (par ARN interférence). Par des approches utilisant la microscopie de fluorescence (FRAP et FRET) nous analyserons la dynamique et la distribution des variants d'histones au sein du noyau. La dynamique des modifications d'histone sera suivie par FRET. Enfin, nous réaliserons l'interruption des gènes codants pour mH2A.1, mH2A.2 et H2ABbd chez la souris. Les équipes qui participent a ce projet possèdent déjà toutes les compétences pour la réalisation des expériences qui sont proposées. L'ensemble de ces approches pour étudier les histones variants apportera des informations nouvelles et uniques qui permettront de mieux comprendre la fonction de ces protéines in vivo.