Développement de nouvelles technologies de transfert d’énergie pour l’étude de la dynamique des complexes protéiques in vivo : application à la mise en place de criblage pour les récepteurs couplés aux protéines G – IMI

La mise au point de technologies permettant l'interaction de biomolécules dans les cellules vivante suscite de plus en plus d'intérêt dans le processus de découverte de nouvelles molécules particulièrement si elles sont compatibles avec un criblage haut-débit (HTS). La taille de ce marché est estimée à 300 millions d'euros en 2007. Ces technologies n'existent aujourd'hui que dans un nombre limité de cas présentent un rapport signal/bruit faible, nécessitent un appareillage et/ou des licences d'utilisation coûteux et sont peu adaptées au criblage HTS. Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) sont une des cibles les plus importantes de la recherche pharmaceutique avec une taille de marché de 100 millions d'euros et une croissance annuelle de 25%. Les principales techniques utilisées pour mettre au point des tests fonctionnels et découvrir des molécules d'intérêt utilisent la radioactivité. les techniques de gène rapporteur et/ou la mesure de seconds messagers. l'objectif de ce projet est d'établir une technologie générale compatible avec le HTS, pour quantifier des interactions entre biomolécules dans les cellules vivantes, avec pour première cible les RCPG. Nous utiliserons notre technologie de transfert d'énergie en temps résolu (FRET) et développerons des techniques de marquage spécifiques des protéines intracellulaires d'intérêt par des traceurs fluorescents à durée de vie longue et des fluorophores organiques adaptés. Le signal étant plus spécifique, sa détection ne requiérera plus de résolution spatiale (plus de microscope). l'utilisateur possédant un fluorimètre multiplaque aura ainsi accès à des données quantitatives d'interprétation simple.