Régulation de la nucléation des microtubules lors de la division cellulaire – gTuRC-reg

Les microtubules s'assemblent dans le spindle pendant la division cellulaire. Des erreurs dans l'assemblage du spindle conduisent à une mauvaise ségrégation des chromosomes et peut-être à un cancer. La nucléation des microtubules est catalysée par des ?-TuRC qui sont recrutés dans les centrosomes aux pôles du spindle pendant la division cellulaire. Les ?-TuRC s'assemblent en une conformation inactive dans le cytosol et ne deviennent actives qu'une fois recrutées dans les centrosomes. La manière dont ces changements d'activité basés sur la structure sont régulés reste inconnue. Un mécanisme possible implique la liaison du domaine CM1 situé dans la N-term des protéines qui attachent les ?-TuRC aux centrosomes, y compris Drosophila Cnn. Nous avons montré que l'expression de fragments de domaine CM1 qui se lient aux ?-TuRC cytosoliques stimule la nucléation des microtubules dans le cytosol et conduit à des défauts au cours de la division cellulaire, mais comment la liaison au domaine CM1 active les ?-TuRC reste inconnue. Nous avons également récemment montré que la liaison du domaine CM1 est auto-inhibée par le domaine CAI. Nous émettons l'hypothèse que ce domaine CAI se replie pour inhiber stériquement le domaine CM1 dans le cytosol et que cette inhibition est soulagée par la phosphorylation de Cnn aux centrosomes. Ici, nous déterminerons l'organisation structurelle de la région N-terminale de Cnn et révéler la voie de phosphorylation en plusieurs étapes qui soulage probablement l'auto-inhibition. Nous utiliserons également nos nouvelles méthodes de purification ?-TuRC combinées à des tests de cryoEM et de ‘single-molecule nucleation assays’ pour déterminer comment la liaison de Cnn stimule la nucléation des microtubules. En particulier, nous testerons notre nouvelle hypothèse selon laquelle la liaison de Cnn stimule la nucléation en favorisant l'oligomérisation des sous-complexes ?-TuSC en ?-TuRC actifs plutôt qu'en modifiant la conformation des ?-TuRC préformés.