INDUCTION DE TOLERANCE SPECIFIQUE DU TRANSGENE APRES THERAPIE GENIQUE – GENETOL

Les vecteurs recombinants dérivés des virus AAV (Adeno-Associated-Virus) sont considérés depuis des années comme des outils de choix pour la thérapie génique. En effet, l?AAV recombinant (AAVr) administré in situ dans différents organes permet dans les modèles de rongeur l?expression à long terme d?un transgène après une seule administration. Néanmoins, de plus en plus d?études montrent que le transfert de ces protocoles aux modèles de gros animaux s?accompagnent de réponses immunes cellulaires et/ou humorales responsables d?une inefficacité de la thérapie génique par perte d?expression du transgène. Cette immunogénicité peut être dirigée contre la capside du vecteur ou directement contre les protéines issues du transgène, qu?elles soient homologues ou hétérologues. Très récemment, l?implication du système immunitaire de l?hôte à l?encontre de la capside virale a été décrite chez l?homme lors d?un essai clinique chez des patients atteints d?hémophilie. La thérapie génique à l?aide d?AAVr rencontre donc un obstacle majeur à son application en clinique Les traitements immunosuppresseurs ne se sont pas révélés toujours efficaces pour contrôler cette réponse immune, et de plus, ils comportent des effets indésirables importants. En parallèle de l?étude des mecanismes responsables de l?immunogénicité des vecteurs AAVr, il apparaît nécessaire de développer des stratégies de tolérance vis à vis du transgène. Pour cela, il est crucial d?utiliser un modèle animal cliniquement pertinent. A ce titre, l?Inserm UMR 649 developpe depuis des années un modèle de transfert de gène à l?aide d?AAVr dans le muscle squelettique de primate. En combinant notre expertise dans le domaine de la thérapie génique chez le primate avec celle de l?Inserm UMR 643 dans le domaine de l?induction de tolérance en transplantation, nous avons défini les objectifs suivants: 1) Il est crucial de disséquer les mécanismes responsables de l?induction de la réponse immune contre le transgène après administration intramusculaire (IM) d?AAVr chez le macaque. Pour cela, nous souhaitons étudier les intéractions précoces du vecteur avec le système immunitaire loco-régional. 2) Par ailleurs, l?Inserm UMR649 a développé une voie alternative de transfert de gène dans le muscle basée sur la perfusion régionale de membre isolée (RI). En utilisant le modèle de transfert du gène Epo sous le contrôle du système inductible à la doxycycline, nos résultats préliminaires montrent que l?administration de l?AAVr via la voie RI n?induit pas de réponse immune contre la protéine transactivatrice du système inductible à la doxycyxline rtTA, alors que cette même protéine est immunogénique dans plus de 80% des primates lorsque l?AAVr est administré par voie IM. Notre deuxième objectif est de caractériser les mécanismes d?induction de la tolérance vis à vis du transgène après administration du vecteur par la voie RI. 3) Il reste cependant nécessaire de développer des stratégies d?induction de tolérance spécifique vis à vis du transgène après transfert de gène à l?aide d?AAVr. Nous (Inserm UMR 643 et UMR 649) avons développé un protocole permettant de générer des cellules dendritiques immatures à partir de la moelle osseuse de macaque. En utilisant le modèle de transfert du gène Epo sous le contrôle de la doxycycline par voie IM, nous souhaitons maintenant évaluer l'utilisation potentielle de ces cellules, montrées tolérogènes dans d?autres modèles, afin d?induire une tolérance spécifique vis à vis du transgène rtTA. L?ensemble de ces résultats devrait permettre le développement de stratégies sûres de transfert de gène dans le muscle à l?aide d?AAV, non seulement pour le traitement de maladies génétiques musculaires mais aussi pour le traitement d?affections génétiques nécessitant la sécrétion de facteurs circulants thérapeutiques.