Modèles d'étude in vitro et in vivo des lymphocytes T CD8+ classe I-restreints et T CD4+ classe II-restreints spécifiques de la proinsuline dans le diabète de type 1 – MELTDT

La caractérisation des autoantigènes des cellules bêta est un défi majeur dans le diabète de type 1. Au cours des dernières années, nous avons étudié la réponse T anti-prépro-insuline chez la souris. L'objectif ici est de mettre en place des modèles d'étude in vitro et in vivo de la réponse T spécifique de la prépro-insuline dans le diabète de type 1 humain. Le but est à terme la compréhension de l'interaction entre lymphocytes T et cellules bêta et la mise en place de stratégies de traitement de la maladie auto-immune.

Les objectifs spécifiques du projet sont l'étude des lymphocytes T CD8+ classe I-restreints et des lymphocytes T CD4+ T DQ8-restreints spécifiques de la prépro-insuline humaine et le développement de modèles animaux d'étude in vivo de la réponse T anti-prépro-insuline humaine. En caractérisant les produits de protéolyse d'une région de la proinsuline couvrant la chaîne B et la région adjacente du peptide C (28-64), nous avons obtenu des résultats préliminaires démontrant que des peptides de la pro-insuline sont reconnus par les lymphocytes T CD8+ des patients atteints de diabète de type 1.

L'objectif 1 est d'étendre cette approche à la région 1-28 (séquence signal et région adjacente de la chaîne B) et à la région 65-110 (région N-terminale du peptide C et chaîne A de l'insuline). Les produits de digestion par le protéasome de peptides couvrant ces 2 régions permettront de définir les résidus C-terminaux de peptides candidats qui seront analysés pour leur liaison aux molécules de classe I les plus fréquentes sur les haplotypes HLA associés au diabète. Les peptides retenus seront utilisés pour évaluer la réponse T CD8+ de patients par ELISpot, avec des tétramères classe I A2.1, A3, A24 et B8 complexés aux peptides, par marquage des cytokines intracytoplasmiques et par l'analyse de leur phénotype naïf, mémoire ou effecteur. Des souris transgéniques HLA-A2.1, -A3, -A24 et -B8 permettront la caractérisation in vivo des réponses T CD8+ anti-prépro-insuline définis.

Le diabète de type 1 est associé à des molécules de classe II particulières, en particulier DQ8. La plupart des épitopes de l'insuline caractérisés à ce jour sont des épitopes DR4. L'objectif 2 du projet est de caractériser les épitopes DQ8 de la prépro-insuline dans des souris transgéniques classe II0/0 exprimant DQ8 et d'étudier leur reconnaissance par les lymphocytes T CD4+ de sujets atteints de diabète de type 1.

L'objectif 3 est de modéliser la réponse anti-prépro-insuline restreinte par HLA-A2.1 et DQ8 in vivo chez la souris. Les souris étudiées seront obtenues par croisement de souris transgéniques pour HLA-A2.1 et DQ8 et de souris transgéniques pour la prépro-insuline humaine. L'immunisation des souris contre les épitopes de la prépro-insuline définis dans les objectifs 1 et 2 permettra l'étude des interactions entre lymphocytes T spécifiques et cellules bêta in vitro et in vivo et l'induction éventuelle d'une insulite et d'un diabète.