MIIM - Microbiologie - immunologie

Entrée des flavivirus dans les cellules cibles : identification et analyse structurale de récepteurs du virus de la Dengue et caractérisation des voies d'entrée virale - Elargissement des études structurales à d'autres virus enveloppés de classe II – DENtry

Résumé de soumission

L'objectif général de ce projet est d'entreprendre des études structurales et fonctionnelles des protéines d'enveloppe (E) virales (classe II) des Flavivirus et d'étudier leurs interactions avec leurs ligands cellulaires. Nous utiliserons pour cela le virus de la Dengue (DV) comme paradigme. Nous rechercherons à identifier le(s) récepteur(s) d'entrée du DV, et caractériserons en détail les voies d'endocytose empruntées par le virus pour infecter ses cellules cibles. Nous profiterons des compétences et l'expérience acquise lors cette étude pour les étendre à d'autres Flavivirus (West Nile, Fièvre Jaune) et plus généralement aux virus enveloppés de classe II.

Nos objectifs spécifiques seront :
1. Etudier la voie d'entrée du DV: i) caractérisation moléculaire et subcellulaire du routage intracellulaire du DV par bloquage des effecteurs moléculaires connus de la voie d'endocytose, ii) identification de nouveaux régulateurs et effecteurs de la voie d'entrée virale par criblage à haut débit à l'aide d'une banque ordonnée d'ARNi.
2. Identifier le(s) récepteur(s) responsable(s) de l'internalisation du DV à l'aide d'approches biochimiques, protéomiques et génétiques. Une fois identifié, nous nous entreprendrons des études structurales du complexe récepteur/ protéine E.
3. En parallèle, nous consacrerons un effort particulier à la production en masse de glycoprotéines E d'autres virus pathogènes, supposés de classe II (hantavirus, pestivirus, rubéole et Rift Valley fever). Ceci nous permettra d'initier des études cristallographiques qui ouvriront la voie à l'étude des mécanismes d'entrée des virus enveloppés de classe II. Nous utiliserons pour cela une approche expérimentale similaire à celle que nous avons développés pour produire des quantités importantes (>10mg) de protéine DV-E dans les surnageants de cellules S2 de Drosophile. La structure des hétérodimères caractéristiques des enveloppes de clase II (prM/E dans le cas du DV) sera également résolue.

Participants
Le 3 groupes ont des compétences et des expertises complémentaires. Le groupe de F.A. Rey (leader) possède une expérience reconnue dans le domaine de la cristallographie à rayons X et est à l'origine des études structurales sur les alphavirus et flavivirus qui ont apporté le concept de virus enveloppés de classe II. Le group Amara est engagé dans l'étude de la pathogenèse du DV et a identifié DC-SIGN comme facteur d'attachement du DV nécessaire à l'infection des cellules dendritiques. Le groupe de J. Garin dirige une plateforme protéomique de référence (CEA). Ce projet compte sur la participation de la plateforme de production de protéines de l'Institut Pasteur. Le consortium (leader F.A Rey) maintient une collaboration étroite dans le cadre du projet international Pediatric Dengue Vaccine Initiative (Gates Fundation) qui a pour but de déterminer la structure cristalline des complexes DC-SIGN /DV-E.

Coordination du projet

Félix REY (INSTITUT PASTEUR)

L'auteur de ce résumé est le coordinateur du projet, qui est responsable du contenu de ce résumé. L'ANR décline par conséquent toute responsabilité quant à son contenu.

Partenaire

INSTITUT PASTEUR
INSTITUT PASTEUR

Aide de l'ANR 450 000 euros
Début et durée du projet scientifique : - 36 Mois

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